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威尼斯注册送28对蛋白质类药物的萃取分离

编辑:管理员    发布时间:2016-10-11 16:28:33

 

    蛋白质是一类具有生理作用,结构十分复杂的生物高分子化合物,由许多氨基酸借助肽链连结而成。由于多肽键的盘曲,折叠形成了三维空间的四级结构模型,不同蛋白质其氨基酸排列顺序和空间结构不同,决定了它们具有不同的生物学或理化特性。  随着基因工程的进展,许多蛋白质已能用微生物发酵和细胞培养技术大规模进行制备,并通过精细的分离纯化手段得到精制品,使越来越多的蛋白质能作为药物应用于临床医疗中,起着重要作用。列如某些蛋白质在生物体内具有激素功能,像胰岛素是治疗糖尿病的特效药,补充人体胰岛素的不足,具有降血糖作用;某些蛋白质是天然抗感染药物,如干扰素催化剂广泛用于临床上,列如许多蛋白酶,淀粉酶和纤维素酶可作为助消化,抗炎作用药物;尿激酶、连激酶等对溶解血栓有一定效果;L-天门冬酰氨酶可用于抗白血病。此外,某些酶制剂还有特殊用途,如青霉素酶能分解青霉素,用于治疗青霉素过敏反应。总之,蛋白质种类很多,用途很广,分离,提取、精制方法常常是集中方法结合使用。

    1.干扰素的萃取  

    干扰素是人体细胞或动物细胞在诱生剂作用下产生的一种蛋白质,具有抗病毒的功能。1957年发现并命名。  干扰素能干扰病毒代谢从而抑制其繁殖,具有抑制细胞分裂和调节免疫系统反应的作用,在治疗病毒性疾病和肿瘤等方面具有重要医疗价值。由于干扰素具有种族特异性,用于人类的干扰素必须由人细胞制备。近年来,由于细胞培养和基因工程的进展,已能通过对人细胞的培养和基因重组的方法来大规模生产干扰素。  提取干扰素的方法有很多,主要是沉淀法和各种层析方法,也采取有机溶剂萃取法,近年 来还出现了双水相萃取法等。为了能得到高纯度的干扰素制品,常常将多种纯化方法结合起来。 由细胞培养和发酵法制备的干扰素存在于细胞内部,采用高压匀浆器或超声波振荡器将四宝破碎,释放出活性组分。温度应维持在5~10℃,以防干扰素失活。  

    1)沉淀法  利用硫酸铵的盐析作用沉淀干扰素,如人β-干扰素在pH2.0条件下,硫酸铵饱和度为25%~55%时产生沉淀,沉淀物再用0.05mol/L NaCL,pH6.0的缓冲液溶解,然后精制。也可用硫酸铵分级沉淀法,如人脐血干扰素,先在pH2.0~3.0,用25%饱和度的硫酸铵先沉淀杂旦白,然后再pH5.0~6.0,用55%饱和度硫酸铵沉淀干扰素,纯化因于可达650.  Donna S.Hobbs 等人报道白细胞干扰素除去细胞碎片后,用1mol/L HCL pH=4,沉淀除去络蛋白,然后加入50%m/m)的三氯乙酸使浓度为1.5%,在4℃下沉淀干扰素,再用0.1mol/ L NaHCO3 溶解沉淀物。  

    2)有机溶剂萃取法  由于干扰素在丁醇中溶解度大而且稳定性较好,故也可采用有机溶剂萃取法。如提取大肠杆菌β-干扰素时,把还有细胞碎片的干扰素提取液用正丁醇萃取,干扰素转入有机相,而固体杂质(细胞碎片等)留在水相,经离心的丁醇萃取液用pH=7.4,0.1mol/L磷酸钠-0.1%SDS缓冲液反萃取,并用冰醋酸酸化,即得到干扰素沉淀,离心后制得粗品。  

    3)双水相萃取法  不同的高分子聚合物的水溶液相互混合后由于他们之间的不相容性,有时会分为两相或高聚物与低分子量化合物混合后,也可能分成两个水相,利用物质在互不相溶的两水相间分配系数的差异来进行分离的方法称双水相萃取法。

双水相体系含水量可达70%~90%,组成体系的高聚物有聚乙二醇,葡聚糖、磷酸盐或硫酸铵等盐类,对生物活性不仅无毒,且具有稳定与保护作用。同时设备简单,放大容易,因而特别适用于分离生物活性物质。  

 

2.萃取设备  

威尼斯注册送28作为萃取专用的离心机。其特点是,在离心力场中先进行充分混合,促使溶质的转移,再进行两相液体的分离和排出。轻相液体从靠近转鼓壁处进料,重液相则从转鼓中心进料。在转鼓内形成两相分散的逆流接触。最终两相达到转鼓的另一端时轻重液相分别浓缩在转鼓中心和内壁处排出。 利用管式、多室式和碟片式离心机结构制成威尼斯注册送28,充分地发挥了管式离心机分离因数高、轴向长度大,适于处理密度差较小的两相液体,室式和碟片式离心机对两相液体分散度高,接触面积大,停留时间长等特点,有利于萃取过程先使两相流分散接触,再使两相流分别浓缩的工艺要求。

    由于可以利用离心力加速液滴的沉降分层,所以允许加剧搅拌使液滴细碎,从而强化萃取操作。威尼斯注册送28特别适用于两相密度差很小或易乳化的物系,由于物料在机内的停留时间很短,因而也适用于化学和物理性质不稳定的物质的萃取。

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